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古朵生物:His 融合蛋白纯化常见问题解答
发布时间:2018-12-17   点击次数:157次

DANBAIGUONIEZHUCHUNHUADEYUANLI:Ni-NTA CHUNHUAJIEZHICHUNHUADAIYOU His6-Tag DERONGHEDANBAISHIMUQIANDANBAICHUNHUAZHONGCHANGSHIYONGDEYIZHONGFANGFA。Ni ZHUZHONGDELVHUANIEHUOZHELIUSUANNIEKEYIYUYOU HIs(ZUDANBAI) BIAOQIANDEJIANXINGDANBAIDANBAIJIEHE,ZUDANBAIBIAOQIANYIBANSHI 6 GEZUANSUAN (JIANXINGANJISUAN)。ZAIDANBAISHANGYANGHOU,DAIYOUZUANSUANBIAOQIANDEDANBAITEYIXINGJIEHEDAOZHUZILI,QITADEZADANBAILIUCHU。Ni ZHUZHONGDELVHUANIEHUOZHELIUSUANNIEYEKEYIYUMIZUOJIEHE,CAIYONGMIZUOXITUO,MIZUOJINGZHENGXINGJIEHEDAOLIUSUANNIESHANG,MUDEDANBAIJIUBEIXITUOLE,ZHEISHIHOUSHOUJICHUANCHUYE,LIMIANJIUSHIMUDEDANBAI,RANHOUTOUXIDIAOMIZUOJIKE。 SHANGYANG,QINGXI,XITUO,JIBENSANGEBUZHOUJIUJIESHULE。

1.png

Ni-NTA CHANGJIANWENTIJIJIANYI

1. His BIAOQIANDANBAIMEIYOUYUZHUJIEHE:

2.png

a. KENENGYUANYIN:CHAOSHENGDEGONGLVBUDUI ( TAIDA,DANBAITANHUA,TAIXIAO,DANBAIMEIYOUSHIFANG)。 JIEJUEFANGFA:GAIBIANCHAOSHENGGONGLV,BINGZAICHAOSHENGQIANJIARURONGJUNMEI。

彩搜网b. KENENGYUANYIN:YANGPINHUOZHESHIJIEHEHUANCHONGYEBUZHENGQUE。 JIEJUEFANGFA:JIANCE pH JIYANGPINHEJIEHEHUANCHONGYEDEZUCHENGFEN。QUEBAOZAIRONGYEZHONGAOHEJIHUOQIANGHAIYUANJIDENONGDUJIMIZUODENONGDUBUSHITAIGAO。

c. KENENGYUANYIN:ZUANSUANBIAOQIANBAOLUBUWANQUAN。 JIEJUEFANGFA:ZAIBIANXINGTIAOJIANXIA ( YONG 4-8 M NIAO,HUO 4-6 M YANSUANGUA) JINXINGCHUNHUA。

d. KENENGYUANYIN:His BIAOQIANDIUSHI。 JIEJUEFANGFA 1:WB JIANCHA His SHIFOUBIAODA,SHANGYOUGOUJIAN,GAIBIAN His-tag DEWEIZHI (C- DUANHUO N- DUAN),BIYAOSHIZENGJIA His GESHU。 JIEJUEFANGFA 2:FUYUDESHIJIANBUGOU,JIANGDILIUSUHEZENGJIAFUYUDESHIJIAN。

JIEJUEFANGFA 3:GAIBIANAOHEDEJINSHULIZI,XUNZHAODAOzuiJIADEJIEHEJINSHULIZI。 Ni2+ TONGCHANGSHICONGSUZHUXIBAODANBAIZHONGCHUNHUADADUOSHU 6×His BIAOJIDEZHONGZUDANBAIZHIDEshouXUANJINSHULIZI。YESHIYIBANCHANGYONGDELIZI。DANBAIHEJINSHULIZIZHIJIANDEJIEHEQIANGDUSHOUJIZHONGYINSUYINGXIANG,BAOKUOZHANGDU、WEIZHI、QINHEBIAOJIZAIDANBAIDEBAOLUCHENGDU、SUOYONGLIZIDELEIXING、YIJIHUANCHONGYEDE pH,YINCIYIXIEDANBAIYONGQITALIZIKENENGGENGRONGYIDIJINXINGCHUNHUAERBUYONG Ni2+。 2. His BIAOQIANDANBAIMEIYOUBEIXITUOXIALAI:

a. KENENGYUANYIN:XITUOTIAOJIANTAIWENHE (ZUANSUANBIAOJIDEDANBAIZHIRENGRANJIEHEZAIZHUSHANG,JIEHELIJIAOQIANG)。 JIEJUEFANGFA:ZENGJIAMIZUODETIDUXITUOHUOJIANGDI pH LAIZHAOCHUzuiJIADEXITUOTIAOJIAN。

彩搜网b. KENENGYUANYIN:JIANGDI pH DEFANGFAXITUODE,RUO pH DIYU 3.5,HUIDAOZHINIELIZITUOLUO。 JIEJUEFANGFA:GAIBIANXITUOBANFA,MIZUOJINGZHENGXINGXITUO。

彩搜网c. KENENGYUANYIN:DANBAIYICHENDIANZAIZHUSHANG。 JIEJUEFANGFA: JIANSHAOSHANGYANGLIANG,HUOSHIYONGMIZUODEXIANXINGTIDUERBUSHIFENBUXITUOYIJIANGDIDANBAIDENONGDU。SHIYONGQUWUJIHUOGAIBIAN NaCl DENONGDU,HUOZAIBIANXINGTIAOJIAN ( QUZHEDIE) XIAXITUO ( YONG 4~8 M NIAO,HUO 4~6 M YANSUANGUA)。

d. 可能原因:非特异性疏水或其他相互反应。 解决方法:加非离子去污剂到洗脱缓冲液 (如:2% Triton X-100) 或增加 NaCl 的浓度。 3. His 标签蛋白洗脱后杂带较多
 

 

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