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实验记录:原代脑微血管内皮细胞(BMEC)分离步骤
发布时间:2018-10-17   点击次数:544次

彩搜网KANDAOHAODUOBAOBAOGUANYUYUANDAITIQUZHONGDOUYOUYIWEN,ZHEIGESHIWOMENSHIYANYUANZAIZUOYUANDAINAOWEIXUEGUANNEIPIXIBAO(BMEC)SHI,WOMENZHEIBIANZUODEYIGESHIYANJILUJIFENLIBUZHOU,JINJINGONGDAJIACANKAO。

YI、SHIYANCAILIAO:

SD DASHU(4~6 ZHOULING,XIONGXING),DAHAOSHOUSHUJIAN,NIEZI,50 ml LIXINGUAN,6 KONGBAN,75% YICHUN,SHENGLIYANSHUI,JIAOYUANMEI,25% BSA,DUOJULAIANSUAN,DMEM/F12 JICHUPEIYANGJI,DMEM/F12 WANQUANPEIYANGJI

ER、SHIYANYIQI:

CHAOJINGGONGZUOTAI,DISULIXINJI,ERYANGHUATANPEIYANGXIANG

SAN、SHIYANBUZHOU:

1. 将大鼠对大鼠实行 anlesi,浸泡在 75% 乙醇中约 1 min
2. 剪开头部皮肤,快速取出大脑,尽量保证完整性
3. 将大脑放入预冷的 DMEM/F12 基础培养基中
4. 在超净工作台中,去掉外层血痂,脑膜,外层血管(平皿上操作)
5. 去掉白质(松散状),保留灰质(贝壳状的左右脑)。
6. 4 ℃ 预冷培养基多次清洗
7. 将大脑剪成 1 mm3 的块状,转移至无菌的 50 ml 离心管中,将块状大脑剪碎,移液枪吹打。
8. 900 rpm 室温离心 4 min,弃去上清,然后添加 5 ml DMEM/F12 无血清培养基用移液枪吹打均匀,然后补加 10 ml 培养基,加 100 μL 胶原酶Ⅱ,37 ℃ 消化 30~45 min,同时用 1 ml 多聚赖氨酸包被 6 孔板。

XIAOHUAWANCHENGHOUJIARUPEIYANGJIZHONGHE,900 rpm SHIWENLIXIN 10 min。

彩搜网ZHIJIEJIARU 15 ml 25% BAS,2 000 rpm SHIWENLIXIN 20 min。LIXINHOULIXINGUANCHUXIANFENCENG,XIACENGSHENHONGSE(SHAOLIANG)WEINAOWEIXUEGUANXIBAO。

彩搜网SHENGLIYANSHUIQINGQINGCHONGXI 6 KONGBANZHONGDUOYUDEDUOJULAIANSUAN,CHONGXI 2 CI。

彩搜网QUXIACENGNAOWEIXUEGUANCHENDIAN,JIARUSHENGLIYANSHUIHUNYUN,900 rpm SHIWENLIXIN 5 min。YONGXINXIAN DMEM/F12 WANQUANPEIYANGJIJIANGXIBAOZHONGXUAN,ZHONGXUANHOUZHUANYIZHI 6 KONGBANZHONGPEIYANG。

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