彩搜网

彩搜网 > 技术支持 > 定量western blot:为什么需要验证抗体

技术支持

定量western blot:为什么需要验证抗体
发布时间:2019-08-20   点击次数:159次

验证抗体对于结果的一致性和重复性是至关重要的,即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白,抗体与其他蛋白的交叉反应性Qing况。在您的论文提交给期刊发表之前,经常需要验证抗体的特异性,但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证,因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而,抗体与抗原的亲和性高度依赖于实验条件,因此,验证您的试验方法中的条件适用于抗体与抗原的结合是十分重要的。

定量western blot尤其适用于确认获得的信号仅来自感兴趣的蛋白。如果没有进行抗体验证(并且验证荧光信号与蛋白质的量呈线性关系),将无法获得下游定量分析所需的准确度和度。

为确保实验质量,国际抗体验证工作组提供了五种不同的抗体验证方法,其中四种方法适用于western blot,他们建议至少使用其中两种方法进行抗体验证。
 

遗传策略

JINGUANZHEIXIEFANGFAYIJINGBEIGENGXINLE,DANZAIKEYANLINGYUZHONGDESHENGWUHUAXUEJIADUITAMENYINGGAIDOUHENSHUXI。JIYONGCRISPR-Cas9HUORNAGANRAO(RNAi)ZAISHIYANZUHEDUIZHAOZUZHONGJINXINGQIAOCHUHUOQIAODISHIYAN,RANHOUSHIYONGTEYIXINGKANGTICEDINGMUBIAODANBAIDEYINGGUANGXINHAO。CHULIHOUDEMUBIAODANBAIZHIDEBIAODAHENSHAOSHENZHIMEIYOU,SUOYIGUANCHADAODERENHEXINHAODOUBIAOMINGKANGTICUNZAIJIAOCHAFANYINGXING。

彩搜网RUXIATUSUOSHI,JIANGJUYOUTEDINGDANBAIZHIDEXIBAOLIEJIEWUJINXINGwestern blot,FENBIESHIYONGLIANGZHONGBUTONGsiRNAFENZIQIAODIMUDEDANBAIDEBIAODA,RUYONGDAO1HEYONGDAO2,YUYONGDAOCDEDUIZHAOZUXIANGBI,WOMENKEYIKANCHUsiRNATUOBADAILAIDEYINGXIANG。

正交策略

ZHEIZHONGFANGFADEJISHUHANLIANGJIAODI,TASHIYONGBUYILAIYUKANGTIDEFANGFA(ZHIPUFA)LAILIANGHUAJIGEDANBAIYANGPINDEBAXINHAO,RANHOUSHIYONGJIYUKANGTIDEFANGFA(western blot)TONGYANGLIANGHUAXIANGTONGDANBAIYANGPINDEBAXINHAO,HOUJIANGTAMENDEXINHAOZHIJINXINGBIJIAO。LIRU,YOUJIZHONGBAXIANGDANBAIZHIZUXUEFANGFAKEYILIANGHUABUTONGYANGPINZHONGDEDANBAIZHIBIAODA。DANGDUIKANGTIJINXINGBIAOJISHIYINGCANKAOZHEIXIEXIANGGUANDEDINGLIANGSHUJU。

XIATUBIJIAOLEDANBAIZHIYINJIHEZHIPUFACEDINGDANBAIBIAODALIANGDEXIANGGUANXING。TONGGUODUIBAZHONGXIBAOXIZHONGDANBAIBIAODALIANGDECEDING,WOMENKEYIKANDAOTAMENDEXIANGGUANXINGGAODA0.97,BIAOMINGGAIKANGTIDUIYUDANBAIZHIYINJIFENXISHIYOUXIAODE。

独立抗体策略

SHIYONGZHENDUIXIANGTONGBABIAODELIANGZHONGHUOGENGDUOZHONGBUTONGKANGTISHICELIANGKANGTITEYIXINGDEZHIGUANQIEYOUXIAODEFANGFA。ZAIXIANGTONGDESHIYANTIAOJIANZHONGCEDINGKANGTIXIANGGUANXINGSHIFENZHONGYAO。RUGUOKANGTIJUYOUBUTONGDEKANGTIBIAOWEI(JIKANGTIJIEHEKANGYUANDEBUTONGQUYU)ZEBIAOMINGGAIKANGTISHIDULIDE。ZHEIYANG,TAMENBUKENENGBIAOXIANCHUTUOBAXIAOYINGBINGJIEHEYUGAIYANJIUWUGUANDETONGYIDANBAIZHI,ZHEIZHONGFANGFAKEJIEHEQIAOCHUHUOQIAODIDEFANGFAYIQISHIYONG。

RUXIATU,DUIMUDEDANBAISHIYONGLELIANGZHONGDULIDEKANGTI,BINGQIEWOMENKEYIQUEDINGLAIZIBAZHONGXIBAOXIZHONGDEMEIYIZHONGXINHAODEXIANGGUANXING。ZHUYIYAOJIANCHAZHENGKUAININGJIAO,YINWEITUOBAXIAOYINGDAILAIDEJIEGUOSHIFEITEYITIAODAIKENENGZAIZHENGKUAIJIAODERENYIWEIZHI。

表达带有标签的蛋白

HAIKEYITONGGUOBIAODAJUYOUQINHEBIAOQIAN(LIRUFLAGHUOv5)HUOYINGGUANGDANBAI(LIRUGFPHUOYFP)DEDANBAIZHILAIYANZHENGKANGTI。RANHOUKEYISHIKANGTIBIAODAYULINGYIZHONGFANGFADEBIAODAXIANGPIPEI,DANSHIZHEIZHONGFANGFAJUXIANXINGZAIYUzuiHAOBIAOJINEIYUANJIYIN。ZHIDEZHUYIDESHIGUOBIAODAMUBIAODANBAIKENENGHUIRENWEIDIYANMEITUOBAJIEHE,RANHOUWUFAYANZHENGKANGTI。

彩搜网YANZHENGKANGTIDUIYUwestern blotSHIYANSHIFENZHONGYAO,BINGQIEwesternFANGUOLAIKEYIYONGLAIYANZHENGELISAHUOZHEIHC。

AzureYOULIANGZHONGCHANPINKEBANGZHUQUERENNINDEKANGTISHIFOUJUYOUTEYIXINGHEXUANZEXINGJIEHE:

(1)HRP偶联的二抗:可用来检测化学发光WB中的低丰度蛋白质;
(2)荧光二抗彩搜网:在荧光Western blot中发射可见光和近红外波长的光。

分享到:

返回列表 | 返回顶部
上一篇 : 关于蛋白定量的N个问题,这篇帮您一一解答!    下一篇 :  古朵新闻:如何跟细菌成为更好的朋友
网站彩搜网 公司简介 产品中心 招聘中心 技术支持 企业动态 联系我们
上海古朵生物科技有限公司版权所有 主营:优质胎牛血清,EA36染色液配制,迪夫快速染色液
GoogleSitemap ICP备案号:沪ICP备19048203号-2 技术支持:安防展览网
在线客服