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血药浓度检检测方法分析
发布时间:2019-01-07   点击次数:200次

药物代谢动力学(Pharmacokinetic, PK)是定量研究药物在生物体内吸收、分布、代谢和排泄规律,并运用数学原理和方法阐述血药浓度随时间变化规律的一门学科。

血清中血药浓度的检测在药代动力学(pharmacokinetics, PK)实验中比较常见,通过系统性检测动物或人血清中血药浓度来分析药物在动物或人体内的吸收、分布、代谢和排泄(即 ADME)情况。其意义包括预测血药水平,制定给药方案,剂量和给药频度,指导合理用药;分析药物相互作用及浓度监测;设计新药,改进药物剂型,设计合理的给药方案等。

今天小编将给大家比较三种具有代表性的血药浓度检测方法。

ELISA 是抗体药血药浓度检测中常用的技术。下面比较三种代表性的用于治疗性抗体的血药浓度检测方法。

 

检测仪器:BMG CLARIOSTAR 酶标仪

样本信息:Rituximab 血清样本

主要试剂:
Human CD20 蛋白
Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Human IgG, Fcγ Fragment Specific

简要流程:
1. 将 human CD20 以 0.5 µg/well 的浓度包被到板上;
2. 将 rituximab 梯度稀释到人血清中(血清终浓度 0.1%);
3. 将稀释过的 rituximab 加到孔板中;
4. 加入 Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Human IgG 二抗;
5. TMB 显色。

检测结果:
为避免非特异背景干扰,该方法对血清样本进行了 1000 倍稀释。由于 CD20 蛋白和抗体的亲和力较弱,因此不能准确估计基质中的抗体药水平。

Anti-idiotypic Capture ELISA

检测仪器:BMG CLARIOSTAR 酶标仪

样本信息:Rituximab 血清样本

主要试剂:
Anti-Rituximab Antibodies(ACROBiosystems, Cat. No. RIB-Y35)
Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Human IgG, Fcγ Fragment Specific

简要流程:
1. 将 Anti-Rituximab Antibodies(ACROBiosystems, Cat. No. RIB-Y35)以 0.05 µg/well 的浓度包被到板上;
2. 将 rituximab 梯度稀释到人血清中(血清终浓度 0.1%);
3. 将稀释过的 rituximab 加到孔板中;
4. 加入 Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Human IgG 二抗;
5. TMB 显色。

检测结果:
该方法血清样本检测范围为 0.156~10 µg/mL,检测灵敏度为 0.156 µg/mL

Bridging ELISA by Anti-idiotypic Antibodies

检测仪器:BMG CLARIOSTAR 酶标仪

样本信息:Rituximab 血清样本

主要试剂:
Anti-Rituximab Antibodies(ACROBiosystems, Cat. No. RIB-Y37)
Biotinylated Anti-Rituximab Antibodies
Streptavidin Protein, HRP (Thermo, Cat.No. 21126)

简要流程:
1. 将 Anti-Rituximab Antibodies(ACROBiosystems, Cat. No. RIB-Y37)以 0.2 µg/well 的浓度包被到板上;
2. 将 rituximab 梯度稀释到人血清中(血清终浓度10%);
3. 将稀释过的 rituximab 加到孔板中;
4. 加入 Biotinylated Anti-Rituximab Antibodies;
5. 加入 Streptavidin Protein, HRP 二抗;
6. TMB 显色。

检测结果:
该方法血清样本检测范围为 0.012~0.78 µg/mL,检测灵敏度为 0.012 µg/mL。

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