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基因转染实验(DEAE-葡聚糖转染法)操作步骤
发布时间:2018-10-29   点击次数:208次

DEAE-葡聚糖介导的 细胞转染 ,其原理还不清楚,可能是通过内吞噬作用而使 DNA 转导进入细胞核,此法只适合暂时转染实验,转染效率与DEAE-葡聚糖浓度以及 细胞 与 DNA/DEAE-葡聚糖混合液接触时间的长短很有关系,可采用较高浓度的DEAE-葡聚糖(1g/L)作用较短时间(30分钟-1.5小时),又可用较低浓度(250g/L)的DEAE-葡聚糖作用较长时间(8小时).


方法如下:
(1)接种鼠L 成纤维细胞 浓度为5×105CO2/孔/皿生长2~3天,当达50%板底面积可用.


(2)乙醇沉淀的4μg的PSV2-neo质粒DNA,空气干燥后溶于40μL的TE中,或取供体 DNA .


(3)用10ml 1×PBS、4mL、10%富合生长因子血清的DMEM洗板(皿).


(4)在80μl热的10g/L DEAE-葡聚糖中缓慢加入DNA,取120μL DNA/DEAE-葡聚糖加到每孔(皿)细胞中,使其分布均匀轻轻转动直到显示均匀一致的红色,培养4小时.


(5)从孔(皿)中吸出DNA/DEAE-葡聚糖,加入5mL 10%DMSD,室温放置1分钟,吸出DMSO,用5mL 1×PBS洗一次吸出,加入10mL培养液(10%血清的DMEM).


(6)培养细胞,在适当时间分析细胞,若含有抗药基因,可用G418选择培养液培养,方法同前.
    众所周知,科研工作者在进行医药方面的科学研究之前,需要制定完善的统计研究设计方案,那么什么样的设计方案才称得上是完善的呢?一般来说,完善的设计方案需具备以下几个条件:实验所需的人力、物力和时间资源;实验设计的“三要素”和“六原则”均符合专业和统计学要求,对实验数据的收集、整理、分析等有一套规范的规定和正确的方法.而其中准确把握统计研究设计的“三要素和六原则”,是科学实验设计的核心.

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